紫外可见光分光光度计的可测波长范围为200一1000nm,也有波长范围为200-400nm的紫外分光光度计,但前者较为普遍。紫外可见光分光光度计的构造原理与可见光分光光度计(如721型分光光度计)相似。由于玻璃吸收紫外光,因此单色器要用石英棱镜或光栅。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比,物质的颜色和它的电子结构有密切的关系,当辐射(光子)引起电子跃迁使分子(或离子)从基 态上升到激发态时,分子(或离子)就会在可见区或紫外呈现吸光,颜色的发生或变化是和分子的正常电子结构的变形联系的。当分子中含有一个或更多的生色基因(即具有不饱和键的原子基团),辐射就会引起分子中电子能量的改变。
紫外可见光分光光度计的三大结构组成部分:
1、光源
有钨丝灯及氢灯(或氛灯)两种。可见光区(360一1000 nm)使用钨丝灯;紫外光区 (200一360 nm)则用氢灯或氛灯。
2、吸收池
由于玻璃吸收紫外光.吸收池要用石英材质。
3、检浏器
检侧器使用两只光电管,一为氧化艳光电管,用于625一1000 nm波长范围;另一只是锑艳光电管,用于200一625 nm波长范围。光电倍增管亦为常用的检测器,其灵敏度比一般的光电管高2个数量级。